Las moléculas del ADN diana atraviesan la membrana a través de un flujo de vacío vertical, lo que facilita su interacción con las sondas de ADN específicas y complementarias inmovilizadas sobre la membrana porosa en un entorno tridimensional, en contraste con la tecnología de dot blot convencional en que la hibridación ocurre de forma pasiva. Con ello se acelera el proceso y se aumenta la sensibilidad, reduciendo los volúmenes de reacción y el tiempo total de procesamiento, desde varias horas a pocos minutos.
Una vez producida la unión entre los amplicones específicos y sus sondas correspondientes, la señal se visualiza mediante una reacción inmunoenzimática colorimétrica con Estreptavidina-Fosfatasa Alcalina y el cromógeno NBT-BCIP, que genera precipitados insolubles en la membrana en aquellas posiciones en las que se ha producido hibridación. El proceso se realiza automáticamente en la plataforma hybriSpot™ y los resultados son analizados con el software hybriSoft™.
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